一、什么是細胞系
初代培養物開始次傳代培養后的細胞,即稱之為細胞系。如細胞系的生存期有限,則稱之為有限細胞系(Finite Cell Line);已獲無限繁殖能力能持續生存的細胞系,稱連續細胞系或無限細胞系 ( I n f i n i t e C e l l L i n e ) 。
二、介紹
細胞系缺少系統命名的標準,導致了細胞系的錯誤鑒定,交叉污染以及缺乏注釋等問題。
三、細胞生物學研究狀況
細胞系作為正?;蚰[瘤組織的模式細胞被廣泛應用于科學研究和藥物開發,然而很大一部分的細胞系被錯誤標記或被其它個體、組織、種系來源的細胞所替代 。
在細胞生物學領域,文章一直在發表,科研成果一直在公布,但是當中哺乳動物細胞被錯誤鑒定,存在交叉污染的情況也同時存在著。
2010年《國際癌癥雜志》(IJC)統計出一列表,在346篇文章中,有 103篇存在細胞被
Hela細胞污染的情況。
建立的大鼠(rat)視網膜神經節的細胞系,命名為RGC-5。在隨后的十幾年時間里,至少230篇論文的研究與假設是建立在這株細胞系上。結果在2009年,序列測定結果表明,RGC-5是一株小鼠(mouse)細胞。
四、細胞系交叉污染
五、細胞交叉污染來源
1. 通過其他實驗室饋贈獲得細胞系
2. 細胞系的長時間連續培養
3. 使用滋養層細胞
4. 培養瓶的錯誤標記
5. 同時操作多種細胞系
6. 多種細胞系公共使用同一培養基
7. CO2培養箱
細胞錯誤鑒定的后果
1. 細胞系的損失
2. 時間和金錢的損失
3. 在公眾領域(文獻等)提供錯誤信息
4. 造成實驗結果不一致或不可重復
5. 個人:尷尬;公眾:羞辱
如何減少細胞系交叉污染
1. 從信譽良好的組織或機構獲得細胞系
2. 良好的文檔編制方法
3. 訓練有素的技術操作員
4. 每種細胞系單獨使用培養基
5. 溶液或試劑分裝使用
6.常規性地注意細胞系身份以及其特性是否發生污染
7.早期做好充足的凍存儲備
8.細胞培養代數不要太高
何時需做細胞系鑒定
1、發表文章或申請課題經費前;
2、使用細胞進行臨床治療(試驗)前;
3、準備凍存保種或已凍存多年的細胞;
4、一個涉及到細胞試驗項目開始/結束時;
5、新得到的細胞或實驗室培養5代以上的細胞;
6、細胞系表現不穩定或結果與預期差別較大;
已開始要求細胞系鑒定的期刊
Cell
Nature;
Bio Techniques;
Cancer Research;
Cancer Discovery;
Clinical Cancer Research;
Molecular Cancer Research;
Cancer Prevention Research;
International Journal of Cancer;
Molecular Cancer Therapeutics;
Cell Biochemistry and Biophysics;
Cancer Epidemiology, Biomarkers & Prevention;
In Vitro Cellular & Developmental Biology – Animal
六、細胞系的鑒定方法
1)鑒定細胞的種系來源:常用方法主要有染色體分析、同工酶分析(乳酸脫氫酶,嘌呤核苷磷酸化酶,葡萄糖-6-磷酸脫氫酶,蘋果酸脫氫酶等)、DNA指紋圖譜等技術。
2)鑒定細胞的組織來源:可通過形態學手段(上皮細胞樣 ,成纖維細胞樣 ,淋巴母細胞樣等 )、檢測組織特異性抗原等進行鑒定。
3)細胞是否發生轉化和惡變:主要通過核型分析、細胞生長行為觀 察(是否喪失接觸抑制)等進行鑒定。
4)細胞有無發生交叉污染:主要通過同工酶及DNA指紋圖譜技術進行鑒定。
七、不同細胞鑒定技術比較細胞系鑒定與STR
STR(Short TandemRepeat,短串聯重復序列)基因分型已被ICLAC、ATCC等機構作為金標準應用于細胞鑒定 。
細胞STR數據庫
美國的ATCC 細胞庫
德國的DSMZ細胞庫
日本的RIKEN細胞庫
日本的JCRB細胞庫
STR位點數分辨率比較
細胞系鑒定服務
為了進一步提高鑒定的分辨率,除了包含ATCC檢測的8個STR和1個性別決定位點Amelogenin外,另新增了11個高度多態性位點 ,共檢測20個STR位點。